Главная Регистрация Статистика Контакты RSS 2.0
   
 
 
Навигация
Главная Все статьи сайта Мировые новости Обратная связь Непрочитанное
 
 
Базовые дисциплины
Анатомия Физиология и этология Латинский язык Цитология Гистология Эмбриология Микробиология Иммунология Генетика Вирусология Фармакология и токсикология
 
 
Естественно-научные дисциплины
Химия Биохимия
 
 
Специальные и клинические дисциплины
Патология Акушерство и гинекология Эпизоотология, инфекционные болезни Паразитология и инвазионные болезни Внутренние незаразные болезни Хирургия
 
 
Другие дисциплины
Зоогигиена Разведение Кормление, кормопроизводство
 
 
Ветеринарная онлайн-библиотека » Новости » ДИАГНОСТИКА ХЛАМИДИОЗОВ ЖИВОТНЫХ (учебно-методическое пособие)

Новости , Эпизоотология, инфекционные болезни : ДИАГНОСТИКА ХЛАМИДИОЗОВ ЖИВОТНЫХ (учебно-методическое пособие)
автор: Admin 9 августа 2009 просмотров: 20714






ПЦР.

При диагностике хламидиоза предусмотрены следующие сроки исследований:

-         выявление специфических антител - от 1 до 5 дней;

-         световая микроскопия - от 30 минут до 2 часов;

-         люминесцентная микроскопия - до 3 часов;

-         выделение и идентификация хламидий - от 7 до 40 дней;

-         выявление ДНК хламидий - от 4 часов до 2 суток.

 

Дифференциальная диагностика

 

Хламидиоз животных следует дифференцировать от: бруцеллеза, лептоспироза, болезни Ауески, листериоза, сальмонеллеза, пастереллёза, микотоксикозов, стрептококкоза, стафилакоккоза. У свиней дополнительно дифференцируют от: гемофилёзного полисерозита и актинобациллярной плевропневмонии, болезни Тешена, энтеровирусного гастроэнтерита, цирковирусной инфекции, респираторно-репродуктивного синдрома, классической чумы, парвовирусной инфекции.

 

Приложение 1

Окраска по методу Романовского - Гимза.

Маточ­ный раствор краски Романовского - Гимза разбавляют фосфатно-буферным раствором (рН 7,2), для получения которого готовят: раствор А - 9,5 г двузамещенного Na2 HРО4 растворяют в 1 л дистиллированной воды; раствор Б - 9,2 г однозамещенного NaН2РО4 растворяют в 1 л дистиллированной воды.

Для приготовления буферного раствора с рН 7,2 сме­шивают 72 мл раствора А с 28 мл раствора Б и добав­ляют 900 мл дистиллированной воды. На каждый милли­литр буферного раствора вносят 2-4 капли маточного раствора краски. Фиксированные мазки окрашивают в специальных кюветах вертикально при комнатной темпе­ратуре в течение 20-24 ч, промывают дистиллирован­ной водой и дифференцируют около 10 с подкисленным эталоном (3-5 капель ледяной уксусной кислоты на 15-20 мл спирта), вновь промывают, высушивают и ис­следуют в световом микроскопе.

Элементарные тельца хламидий красно-фиолетовые, промежуточные формы - сине-фиолетового цвета.

Для выявления хламидий, расположенных внутри клеток, используют модифицированный метод Романов­ского - Гимза. Фиксированные препараты-мазки покрывают ма­точным раствором красителя на 10 мин. Краску не сли­вают, добавляют 3-5 капель дистиллированной воды (рН 7,0) и окрашивают при комнатной температуре 16- 18 ч. После промывки дистиллированной водой диффе­ренцируют этанолом 45-60 с, вновь промывают дистил­лированной водой и повторно дифференцируют этано­лом 30 с. Промывают дистиллированной водой, высуши­вают на воздухе.

Элементарные тельца хламидий, расположенные в цитоплазме клеток, красно-фиолетового цвета, тельца-включения - сине-фиолетовые.

Окраска по модифицированному методу Гименеж (Набли Б., Таризо М., 1967). Мазки готовят из стенок желточных мешков куриных эмбрионов, в которых куль­тивировали хламидий, затем фиксируют над пламенем. Препараты окрашивают 0,25%-ным водным раствором основного фуксина в течение 5 мин, промывают водой, окрашивают 0,8%-ным водным раствором малахитового зеленого 30 с и промывают водой. Затем обесцвечивают 0,5%-ным раствором лимонной кислоты в течение 2 мин, промывают и повторно окрашивают малахитовым зеле­ным 30 с. Обесцвечивают 1%-ным раствором хлоралгидрата в течение 1 мин, промывают водой, высушивают. Элементарные тельца и тельца-включения хлами­дий - красного цвета, фон зеленый.

Окраска по модифицированному методу Стемпа. Пре­параты фиксируют над пламенем и окрашивают карбо­ловым фуксином Циля, разведенным дистиллированной водой 1:5 (рH - 7,4) в течение 15 минут.  Маточный раствор
готовят по прописи: 1 г основного фуксина растворяют в 10 мл этилового спирта, 5 г карболовой кислоты (фенола)- в 100 мл дистиллированной воды. Оба раство­ра смешивают, фильтруют через 4-5 слоев фильтровальной бумаги. Хранится продолжительное время. Пе­ред употреблением нужное количество разводят 1:5.

Препараты промывают дистиллированной водой, диф­ференцируют 0,5%-ным раствором уксусной кислоты или 0,05%-ным раствором серной кислоты в течение 1 мин (модификация Гаффарова X. 3.), промывают водой, окрашивают 1%-ным раствором малахитовой зелени 30 с, снова промывают водой, высушивают фильтровальной бумагой.

Элементарные тельца хламидий красные на сине-зе­леном фоне. Инициальные тельца в одних случаях окра­шиваются в красный, в других - в зеленоватый цвет. Метод рекомендуется для исследования патологическом материала, в частности плаценты.

Окраска по Маккиавелло. Готовят три раствора: раствор А - 250 мг фуксина основного растворяют в 100 мл бидистиллированной воды (хранится 10 дней при температуре 4°С); раствор В - 10 г лимонной кислоты растворяют в 100 мл бидистиллированной воды; рас­твор С - 1 г метиленовой сини растворяют в 100 мл би­дистиллированной воды.

Техника окраски: мазки фиксируют над пламенем; раствор А фильтруют через фильтровальную бумагу и наносят на мазок, покрытый фильтровальной бумагой, на 5-10 мин; промывают дистиллированной водой; диффе­ренцируют в растворе В, состоящем из 5 мл раствора В и 100 мл бидистиллированной воды, в течение 20-30 с; промывают водопроводной водой; докрашивают раство­ром С в течение 30 с; промывают водой, высушивают на воздухе. Хламидий окрашиваются в ярко-красный цвет, клет­ки патологического материала - в светло-синий, ядра клеток - в темно-синий цвет.

Окраска по Маккиавелло в модификации Здродовского. Готовят три раствора: раствор А (сохраняется в холодильнике в течение нескольких дней) - основной фуксин - 1 г, карболовая кислота - 5 г, этиловый спирт - 10 мл, дистиллированная вода - 100 мл; рас­твор Б - 0,5%-ный водный раствор метиленовой сини; раствор В - 0,5%-ный раствор лимонной или 0,15%-ный раствор уксусной кислоты.

Техника окраски. Препараты быстро фиксируют над пламенем и покрывают на 5 мин свежеприготовленной смесью: раствор А - 10-25 капель, бидистиллирован­ной воды или фосфатный буфер (рН 7,4) - 10 мл; про­мывают дистиллированной водой; около 3 с дифферен­цируют в растворе В; промывают продолжительно дистиллированной водой; быстро окрашивают (10 с) рас­твором Б; промывают проточной водой, высушивают, ис­следуют с использованием иммерсионных систем. Хла­мидий рубиново-красного цвета на светло-голубом фоне. Метод дает хорошие результаты только при окрашива­нии свежих препаратов.

   Приложение 2

Окраска акридиновым оранжевым для люминесцентной микроскопии. Готовят жидкость Корнуа - шесть объемов 96-100%-ного этилового спирта, три объема хлороформа, один объем ледяной уксусной кислоты. Фосфатно-цитратный буфер (рН 3,8): лимонная кисло­та - 10 г, Nа2НРО4-7Н2О - 15 г, дистиллированная во­да - 1 л. При наличии Nа2НРО4- 12Н2О проводят пере­расчет:

2НРО4´7Н2О   НЬ 268,157

2НР04´12Н20    НЬ 358,157

15 г - 268,157                         Х =  15 ´ 358,157/268,157 = 20,034 

х - 358,157

Маточный раствор акридинового оранжевого: акри­диновый оранжевый - 0,1 г, фосфатно-цитратный бу­фер - 100 мл (может храниться в холодильнике). Рабо­чий раствор акридинового оранжевого готовят в кон­центрации 1: 10 тыс. - 1: 30 тыс. на основе указанного буфера.

 

 

 

 

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ

 

  1. Белоусов В.И. Средства специфической профилактики и диагностики хламидиоза, кампилобактериоза, сальмонеллеза и лептоспироза животных.//Автореф. дис. д-ра вет. наук. - М. - 1997. - 41с.
  2. Бортничук В.А. Хламидиоз свиней.//Справочное издание. "Урожай" - Киев. - 1991. - 193с.
  3. Гласкович А.А., Вострикова В.Н. Диагностика хламидиозов сельскохозяйственных животных / Методич. рекоменд. - Витебск. - 1994. С.8 - 26.
  4. Горовиц. Э.С., Тимашева О.А., Петров В.Ф., Карпунина Т.И. Диагностика хламидийных инфекций человека и животных.//Журн. микробиология, эпидемиология и иммунобиология. - М. - 1998. - №2. - С.72-75.
  5. Евстифеев В.В. Усовершенствование средств диагностики






 
 
Ключевые теги: хламидии, раствор, болезнь, клетки, дистиллированный раствор, животные
Уважаемый посетитель, Вы зашли на сайт как незарегистрированный пользователь. Мы рекомендуем Вам зарегистрироваться либо зайти на сайт под своим именем.

Другие новости по теме:

  • VetLib.ru
  • Специфическая профилактика рожи свиней (реферат)
  • ЦИРКОВИРУСНАЯ ИНФЕКЦИЯ СВИНЕЙ
  • КРИТЕРИИ, ХАРАКТЕРИЗУЮЩИЕ ОКОНЧАТЕЛЬНОЕ УСТАНОВЛЕНИЕ ДИАГНОЗА НА ПНЕВМОЭНТ ...
  • СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА РЕСПИРАТОРНЫХ И ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ ТЕ ...


  •  (голосов: 2)
     
     
     
    Авторизация
    Логин:
    Пароль:
     
     
    Партнёры
     
    Календарь
    «    Декабрь 2018    »
    ПнВтСрЧтПтСбВс
     
    1
    2
    3
    4
    5
    6
    7
    8
    9
    10
    11
    12
    13
    14
    15
    16
    17
    18
    19
    20
    21
    22
    23
    24
    25
    26
    27
    28
    29
    30
    31
     
     
    Метки
    бактерии, Болезнь, вакцина, вещество, Вирус, Возбудитель, гормоны, железы, животные, заболевание, инфекция, кислота, кислоты, кишечник, клетка, клетки, корм, кровь, Лечение, матка, мозг, молоко, натрий, оболочка, опухоль, организм, органы, печень, препарат, процесс, раствор, реакция, свиньи, скот, сосуды, сыворотка, телята, температура, ткани, функции

    Показать все теги
     
    Рекомендуем
     
     
     
    Каталог : Анатомия Физиология и этология Латинский язык Гистология Эмбриология Микробиология Вирусология Генетика Фармакология и токсикология Биохимия Патология Акушерство и гинекология Эпизоотология, инфекционные болезни Паразитология и инвазионные болезни Внутренние незаразные болезни Хирургия Зоогигиена Разведение животных Кормление, кормопроизводство
    При использовании материалов сайта, гиперссылка на на www.vetlib.ru обязательна. 
    Copyright © 2009-2017 VetLib.ru