Главная Регистрация Статистика Контакты RSS 2.0
   
 
 
Навигация
Главная Все статьи сайта Мировые новости Обратная связь Непрочитанное
 
 
Базовые дисциплины
Анатомия Физиология и этология Латинский язык Цитология Гистология Эмбриология Микробиология Иммунология Генетика Вирусология Фармакология и токсикология
 
 
Естественно-научные дисциплины
Химия Биохимия
 
 
Специальные и клинические дисциплины
Патология Акушерство и гинекология Эпизоотология, инфекционные болезни Паразитология и инвазионные болезни Внутренние незаразные болезни Хирургия
 
 
Другие дисциплины
Зоогигиена Разведение Кормление, кормопроизводство
 
 
Ветеринарная онлайн-библиотека » Новости » ДИАГНОСТИКА ИНФЕКЦИОННЫХ И ИНВАЗИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ

Новости , Паразитология и инвазионные болезни : ДИАГНОСТИКА ИНФЕКЦИОННЫХ И ИНВАЗИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ
автор: Admin 22 мая 2010 просмотров: 18876






Общие принципы лабораторной диагностики вирусных респираторных и желудочно-кишечных заболеваний

 

Диагностика играет решающую роль в системе мероприятий по борьбе с болезнями животных вирусной этиологии. Быстро и правильно поставленный диагноз обеспечивает успешное проведение мероприятий по ликвидации вспышек вирусных болезней, так как позволяет четко уяснить конкретную эпизоотическую ситуацию и своевременное принятие целенаправленных мер по оздоровлению поголовья крупного рогатого скота и свиней с наименьшими потерями.

Обычно диагноз ставят на основании эпизоотологических данных, клинических симптомов болезни, патологоанатомических изменений органов и тканей, результатов лабораторных исследований патологического материала и сывороток крови от животных. При вирусных пневмоэнтеритах особенно важную роль отводят лабораторной диагностике, так как при этих заболеваниях наблюдают сходные эпизоотические данные, клинические симптомы и патологоанатомические изменения; нередки случаи атипичных и латентных форм течения болезни, а также смешанных инфекций, когда болезнь вызвана не одним, а двумя и более этиологическими агентами (например,  двумя или тремя вирусами, вирусом и бактериями, вирусом и микоплазмами).

Все методы лабораторной диагностики вирусных инфекций мо­жно­ разделить на три группы:

— экспресс-методы — они основаны главным образом на быстром обнаружении в патологическом материале вируса и его анти­гена;

— вирусологические методы — основаны на изоляции активных форм вируса из патологического материала и его идентификация в серологических реакциях, отличающиеся длительным и трудоемким процессом исследований, но дает точный ответ о наличии возбудителя болезни;

— методы ретроспективной диагностики — основаны на установлении динамики титра антител в парных пробах сывороток крови больных и переболевших животных и дают высокодостоверные результаты, но ретроспективно.

В проведении диагностических исследований при вирусных пневмоэнтеритах крупного рогатого скота и свиней из экспресс-методов широкое применение в лабораторной практике получили метод флуоресцирующих антител, иммуноферментный анализ, реакция иммунодиффузии,  иммунная электронная микроскопия.

После изоляции вирусов нашли применение такие методы идентификации возбудителей, как реакции нейтрализации, связывания комплемента, иммунодиффузии, иммунофлюоресценции, иммуноферментный ана­лиз, гемагглютинации, торможения гемагглютинации, гемадсорбции, торможения гемадсорбции.

Но наиболее широкое применение получили ретроспективные методы серологической диагностики вирусных пневмоэнтеритов крупного рогатого скота и свиней. Это такие диагностические методы, как реакции нейтрализации, непрямой гемагглютинации, задержки гемагглютинации, иммунодиффузии, связывания комплемента, иммуноферментный анализ.

 

КРАТКАЯ ХАРАКТРИСТИКА МЕТОДОВ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ ПРИ ДИАГНОСТИКЕ ПНЕВМОЭНТЕРИТОВ ТЕЛЯТ И ПОРОСЯТ

Выделение вирусов из биологического материала

 

Для выделения вирусов-возбудителей пневмоэнтеритов телят (инфекционного ринотрахеита, диареи, парагриппа-3, респираторно-синцитиального вируса, рота-, корона-, парво- и аденовирусов) и поросят(вирусы трансмиссивного гастроэнтерита свиней, ротавирусная и парвовирусная   инфекции) применяют первично-трипсинизированные и перевиваемые культуры клеток почек эмбрионов коровы, почек телят, тестикул бычков, легких эмбрионов коров, селезенки эмбрионов, почки поросенка, легких эмбриона свиней  и т.д.

Вируссодержащий материал (слизистая оболочка носа, пораженного кишечника, преджелудков, селезенки, легких, трахеи), полученный в виде 10—20%-ной суспензии и приготовленный при помощи центрифугирования при 3,0—5,0 тыс.об./мин., после 4-часовой экспозиции с антибиотиками при 4°С вносят по 0,1—0,2 мл не менее чем в 4—5 пробирок с культурой клеток.

Флаконы с фекалиями замораживаются при -20°С  в течение 18—24 часов, затем оттаивают при 37°С и центрифугируют при 5 тыс.об./мин. в течение 20 мин. Надосадочную жидкость отсасывают в стерильные пробирки, куда вносят по 1000 ЕД пенициллина и стрептомицина, 50 ЕД нистатина и выдерживают в течение 2—4 часов при +2+4°С, дополнительно центрифугируют и после отрицательного бактериологического контроля используют для заражения культуры клеток. Зараженные и контрольные пробирочные культуры ставят на инкубацию при 37°С на 7—10 суток до появления ЦПД. В случае, если в первом пассаже ЦПД будет отсутствовать, необходимо провести 3—4 слепых пассажа. При наличии в исследуемом материале цитопатогенных штаммов вирусов, возбудителей пневмоэнтеритов телят, в клеточном монослое обнаруживается ЦПД, характерное для каждого из вирусов.

Идентификацию выделенных цитопатогенных изолятов вирусов проводят реакциями нейтрализации, иммунодиффузии, связывания комплемента,  иммунофлюоресценции, иммуноферментного анализа.

Реакция нейтрализации

Реакция биологической нейтрализации вируса (РН), основанная на способности специфических антител достаточно прочно соединяться с вирусной частицей, начала применяться еще на заре вирусологии. В результате взаимодействия между вирусом и антителом происходит нейтрализация инфекционной активности вируса вследствие блокады антигенных детерминант, ответственных за соединение вирусных частиц с чувствительными клетками. В результате вирус утрачивает способность размножаться в чувствительных к нему биологических системах in vitro и in vivo. Несмотря на внедрение в вирусологических лабораториях многих современных методов изучения биологической активности вируса и процессов его взаимодействия с антителами, реакция нейтрализации остается одним из основных серологических тестов. Она позволяет идентифицировать, а затем определить типовую принадлежность выделенного вируса.

Результаты реакции нейтрализации  становятся очевидными после того, как смесь вируса с гомологичными ему антителами после определенной по времени экспозиции будет внесен в чувствительную биологическую систему (тканевая культура клеток, куриный эмбрион, организм восприимчивого животного), где вирус может размножаться и вызывать поддающиеся учету изменения и которые будут подавлены частично или полностью в присутствии антител.

 В диагностике вирусных респираторных инфекций крупного рогатого скота реакция нейтрализации нашла широкое распространение и до сих пор остается классическим методом как для идентификации выделенных вирусов, так и для обнаружения вируснейтрализующих антител.

 Для постановки реакции нейтрализации при диагностике пневмоэнтеритов телят в качестве биологических объектов используют те же культуры клеток, что и для выделения вирусов. Реакцию нетрализации для идентификации вирусов ставят с заранее известными противирусными сыворотками, а для выявления антител в биологическом материале - с заранее известными вирусами.

Постановка реакции нейтрализации при идентификации вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота требует наличия:

-специфической сыворотки против инфекционного ринотрахеита;

-вируссодержащего испытуемого материала, свободного от микробов;

-культуры клеток ПЭК, ПТ, ТБ или МДБК;

-контрольной отрицательной сыворотки;

-питательной вирусологической среды и вспомогательных растворов.

Перед постановкой реакции сыворотки разводят питательной средой до 1:10 и инактивируют в течение 30 мин. при температуре 56°С. Все манипуляции осуществляют в строго стерильных условиях.

В первый ряд стерильных пробирок (7 шт) вносят по 2 мл специфической сыворотки, во второй ряд - по 2 мл отрицательной.

После приготовления десятикратных разведений вируссодержащего материала (конечное разведение 10-7) с использованием питательной среды вносят по 2 мл каждого разведения в два ряда с сыворотками. Пробирки тщательно встряхивают и выдерживают при 37°С в течение двух часов. Затем из каждой пробирки со смесью вируса и сыворотки по 1 мл переносят в 4 пробирки с культурой клеток и после адсорбции вируса на клеточном монослое инкубируют их при 37°С, ежедневно просматривают на наличие ЦПД. Окончательный учет результатов реакции осуществляют на 5—7 день.

Видовую принадлежность вируса и его титр определяют по разности показателей между отрицательной и положительной сыворотками. Разница должна быть не менее чем на 2 lg.

Реакция связывания комплемента

Реакция связывания комплемента   является одной из традиционных серологических реакций, применяемых для диагностики многих вирусных заболеваний, а также составляет основу некоторых других методов выявления противовирусных антител. Хотя реакция нейтрализации, торможения гемагглютинации, непрямой гемагглютинации, иммуноферментный анализ превосходят реакцию связывания комплемента по чувствительности, однако простота методики, раннее обнаружение антител, а также выявление вирусных антигенов, не обладающих гемагглютинирующими свойствами, объясняют ее широкое применение 







 
 
Ключевые теги: диагностика, антитела, сыворотка, вирус, антигены, комплемент
Уважаемый посетитель, Вы зашли на сайт как незарегистрированный пользователь. Мы рекомендуем Вам зарегистрироваться либо зайти на сайт под своим именем.

Другие новости по теме:

  • КРИТЕРИИ, ХАРАКТЕРИЗУЮЩИЕ ОКОНЧАТЕЛЬНОЕ УСТАНОВЛЕНИЕ ДИАГНОЗА НА ПНЕВМОЭНТ ...
  • Аденовирусная инфекция
  • ВИРУСНАЯ ДИАРЕЯ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
  • РЕСПИРАТОРНО-СИНЦИТИАЛЬНАЯ ИНФЕКЦИЯ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
  • ПАРВОВИРУСНАЯ ИНФЕКЦИЯ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА


  •  (голосов: 1)
     
     
     
    Авторизация
    Логин:
    Пароль:
     
     
    Партнёры
     
    Календарь
    «    Июль 2018    »
    ПнВтСрЧтПтСбВс
     
    1
    2
    3
    4
    5
    6
    7
    8
    9
    10
    11
    12
    13
    14
    15
    16
    17
    18
    19
    20
    21
    22
    23
    24
    25
    26
    27
    28
    29
    30
    31
     
     
    Метки
    бактерии, Болезнь, вакцина, вещество, Вирус, Возбудитель, гормоны, железы, животные, заболевание, инфекция, кислота, кислоты, кишечник, клетка, клетки, корм, кровь, Лечение, матка, мозг, молоко, натрий, оболочка, опухоль, организм, органы, печень, препарат, процесс, раствор, реакция, свиньи, скот, сосуды, сыворотка, телята, температура, ткани, функции

    Показать все теги
     
    Рекомендуем
     
     
     
    Каталог : Анатомия Физиология и этология Латинский язык Гистология Эмбриология Микробиология Вирусология Генетика Фармакология и токсикология Биохимия Патология Акушерство и гинекология Эпизоотология, инфекционные болезни Паразитология и инвазионные болезни Внутренние незаразные болезни Хирургия Зоогигиена Разведение животных Кормление, кормопроизводство
    При использовании материалов сайта, гиперссылка на на www.vetlib.ru обязательна. 
    Copyright © 2009-2017 VetLib.ru