Главная Регистрация Статистика Контакты RSS 2.0
   
 
 
Навигация
Главная Все статьи сайта Мировые новости Обратная связь Непрочитанное
 
 
Базовые дисциплины
Анатомия Физиология и этология Латинский язык Цитология Гистология Эмбриология Микробиология Иммунология Генетика Вирусология Фармакология и токсикология
 
 
Естественно-научные дисциплины
Химия Биохимия
 
 
Специальные и клинические дисциплины
Патология Акушерство и гинекология Эпизоотология, инфекционные болезни Паразитология и инвазионные болезни Внутренние незаразные болезни Хирургия
 
 
Другие дисциплины
Зоогигиена Разведение Кормление, кормопроизводство
 
 
Ветеринарная онлайн-библиотека » Новости » Лабораторно практические занятия по токсикологии

Новости , Фармакология и токсикология : Лабораторно практические занятия по токсикологии
автор: Admin 8 декабря 2010 просмотров: 40099






этой целью обычно берут н-гексан и диметилфор-мамид или ацетонитрил.

Осаждение жиров и восков основано на плохой их растворимости в холодном ацетоне, для чего экстракт вымораживают в холодильнике или в приготовленных охлаждающих смесях со льда (снега) и различных со­лей (хлорида натрия, сульфата и карбоната натрия, нитрата аммония и натрия).

Осаждение белков осуществляют коагулирующей смесью, состоящей из 5 г аммония, 10 мл 85 %-ного раствора ортофосфорной кислоты и до 1 л дистиллиро­ванной воды.

Колоночная хроматография проводится при помощи стеклянных колонок, заполненных силикагелем или ди­оксидом кремния.

Концентрирование экстрактов осущес­твляют при помощи вакуум-ротационного испарителя, испарением с капилляром под вакуумом на водяной бане и в токе воздуха на водяной бане. Самые низкие потери препаратов бывают при использовании ротаци­онного испарителя. В остальных случаях необходимо руководствоваться требованием: не повышать темпера­туру водяной бани свыше 40 °С и не упаривать досуха очищенные экстракты.

Разделение ядовитых веществ, содержа­щихся  в  концентрированном  экстракте,  проводят  на 10 пластинках с тонким слоем сорбента в хроматографических камерах с подвижным растворителем.

Стеклянные пластинки размером 9Х12, 13Х18 или 20X20 см тщательно моют раствором кальцинирован­ной соды, затем хромовой смесью, водопроводной и дис­тиллированной водой, затем сушат в вертикальном по­ложении. Перед нанесением сорбционного слоя обраба­тывают спиртом и эфиром.

Сорбционную массу готовят из силикагеля или окиси алюминия, которые закрепляют на пластинках крахма­лом или гипсом.

Подготовка силикагеля. Очищенный от примесей си-ликагель заливают на 18—20 ч разведенной (1:1) соля­ной кислотой, после сливания которой силикагель про­мывают водой и кипятят 2—3 ч в разбавленной (1:1) азотной кислоте. После промывания водопроводной, за­тем дистиллированной водой до нейтральной реакции силикагель сушат при 130 °С в течение 4—6 ч, дробят на шаровой мельнице, просеивают через сито 100 меш (1600 отверстий на 1 см2) и хранят в склянке с притер­той пробкой.

Подготовка гипса. Гипс (CaSO4- 2H2O) прокалива­ют в сушильном шкафу при 160 °С в течение 6 ч, расти­рают в ступке и просеивают через сито 100 меш.

Приготовление сорбционной массы.

1.    Силикагель   с   крахмалом.   На   15   пластинок (9Х 12 см)   берут 40 г силикагеля марки ШСК или КСК-2,   1   г растворимого крахмала  и   125  мл  воды; 40 г силикагеля марки КСС-3, 1,5 г крахмала и 110 мл воды. Крахмал заваривают в  15 мл воды, доливают остальную воду, засыпают силикагель и хорошо переме­шивают.

2.  Силикагель с гипсом. На 10 пластинок (9Х 12 см) 35 г силикагеля КСК и 2 г гипса растирают в фарфоро­вой ступке, прибавляют 90 мл воды и размешивают до однородной массы.

3.   Оксид   алюминия  с   гипсом.   На   10   пластинок (9Х 12 см) 50 г оксида алюминия, просеянного через сито 100 меш, и 5 г гипса тщательно смешивают в фар­форовой ступке, переносят в колбу, добавляют 75 мл воды и встряхивают до образования однородной массы.

Для получения слоя сорбента стандартной толщины используют специальные приборы или берут две чайные ложки сорбционной массы, наносят на пластинку (9Х 12 см) и покачиванием равномерно распределяют по поверхности. Пластинки сушат при комнатной темпе­ратуре и хранят в эксикаторе.

В качестве хроматографических камер используют стеклянные сосуды с плотно закрывающейся крышкой или эксикаторы, на дно которых наливают подобранный для каждого ядовитого вещества подвижный раствори­тель (например, для разделения ХОС берут н-гексан, петролейный эфир, бензол, гептан и их смеси; для ФОС — хлороформ, гексан, ацетон и их смеси).

Для обнаружения пятен ядовитых веществ на хрома-тограммах готовят проявляющие реактивы, которые об­разуют с ними цветные комплексы. Обычно пластинки опрыскивают раствором реагента при помощи стеклян­ного пульверизатора.

Ход анализа. На стартовую линию пластинки (1,5 см от края) наносят в виде точек анализируемые пробы и известные количества стандартных растворов предпо­лагаемых ядовитых веществ при помощи шприца на 1 мл, микропипетки или специального микрометрическо­го шприца. Размер пятна на слое сорбента в диаметре не должен превышать 1 см.

За 1 ч до анализа в хроматографическую камеру заливают подвижный растворитель, уровень которого не должен превышать 0,5 см. Помещают пластинки в рас­творитель и закрывают плотно камеру. После поднятия растворителя по сорбенту на высоту 10 см пластинки вынимают, отмечают верхнюю границу подъема раство­рителя (линию фронта), высушивают на воздухе и обра­батывают проявляющим реагентом.

Качественная идентификация ядовитых веществ проводится по величине Rf (отношение расстояния от линии старта до центра пятна к расстоянию от линии старта до линии фронта), которая для каждого яда постоянна. Количественный анализ основан на измере­нии площадей пятен исследуемого вещества и известно­го количества стандартного вещества.

 

 

ЗАНЯТИЕ № 5

 

5. Тема:  Определение  пестицидов в кормах, тканях животных и молоке методом тонкослойной хроматографии.                        

Цель занятия: освоить определение  пестицидов в кормах, тканях животных и молоке методом тонкослойной хроматографии.                      

Материадьное обеспечение: ацетон, н-гексан, петролейный эфир, бензол, хлороформ или их смеси,  спирты, хлороформ, этилацетат, пластинки с тонким слоем сорбента, пробы корма и патматериал.

Ход работы:

 

1.Определение гексахлорциклогексана в комбикормах

40 г комбикорма увлажняют 60 мл воды и оставляют на ночь, после чего переносят в делительную воронку и 2 раза экстрагируют сначала 50 мл, затем 100 мл гек-сана-ацетона (1:1). Промывают 50 мл воды. После разделения водный слой сливают и снова 3 раза экстраги­руют 40 мл гексана. Затем экстракты объединяют, су­шат, испаряют до 30 мл и очищают концентрированной серной кислотой.

Подвижный растворитель — н-гексан. Проявляю­щий реагент — аммиачно-ацетоновый раствор нитрата серебра в ацетоне (0,5 г нитрата серебра растворяют в 5 мл воды, добавляют 5 мл аммиака и доводят объем ацетоном до 100 мл). После опрыскивания пластинки облучают УФ-лучами под лампой ПРК-4. Гексахлорцик-логексан проявляется в виде черных пятен на белом фоне с величиной Rf на окиси алюминия для гамма-изомера 0,3; для альфа-изомера 0,34.  

 

2.Определение полихлорпинена и полихлоркамфера в кормах, тканях животных и молоке

 Навеску измельченного корма или тканей животных массой 25 г заливают в склянке с притертой пробкой 50 мл н-гексана и экстрагируют дважды в течение 2 ч. Навеску жира массой 5 г расплав­ляют в 50 мл нагретого гексана.

В пробу молока (25 мл) добавляют 5 мл раствора оксалата калия, 5 мл насыщенного раствора натрия хлорида, 75 мл ацетона. Смесь встряхивают в течение 2 мин и фильтруют через бумажный фильтр в делитель­ную воронку на 500 мл, добавляют 200 мл воды и триж­ды экстрагируют гексаном порциями по 20 мл.

Во всех случаях объединенные экстракты очищают серной кислотой, концентрируют до необходимого объема и хроматографируют.

Подвижный растворитель — смесь н-гексана и изо-пропилового спирта (1:1). Проявляющий реактив — раствор нитрата серебра с аммиаком или раствор нитра­та серебра с 2-феноксиэтанолом (0,3 г нитрата серебра в мерной колбе на 100 мл растворяют в 2 мл воды, добав­ляют 10 мл 2-феноксиэтанола и доводят ацетоном объем до метки) с последующим облучением УФ-светом.

 

3. Определение фталофоса и его метаболитов в







 
 
Ключевые теги: натрий, раствор, корм, вода, калий
Уважаемый посетитель, Вы зашли на сайт как незарегистрированный пользователь. Мы рекомендуем Вам зарегистрироваться либо зайти на сайт под своим именем.

Другие новости по теме:

  • Ветеринарно-санитарная экспертиза консервов (методичка)
  • Ветеринарно-санитарная экспертиза рыбы (методичка)
  • РАЗБАВЛЕНИЕ, ХРАНЕНИЕ И ТРАНСПОРТИРОВКА СПЕРМЫ (реферат)
  • Ветеринарная рецептура (учебно-методическое пособие) - жидкие и газообразны ...
  • Лабораторно практические занятия по фармакологии


  •  (голосов: 8)
     
     
     
    Авторизация
    Логин:
    Пароль:
     
     
    Партнёры
     
    Календарь
    «    Январь 2021    »
    ПнВтСрЧтПтСбВс
     
    1
    2
    3
    4
    5
    6
    7
    8
    9
    10
    11
    12
    13
    14
    15
    16
    17
    18
    19
    20
    21
    22
    23
    24
    25
    26
    27
    28
    29
    30
    31
     
    Метки
    бактерии, Болезнь, вакцина, вещества, вещество, Вирус, Возбудитель, диагностика, железы, животные, заболевание, инфекция, кислота, кислоты, кишечник, клетка, клетки, корм, кровь, Лечение, матка, мозг, молоко, натрий, оболочка, опухоль, организм, органы, печень, препарат, процесс, раствор, реакция, свиньи, скот, телята, температура, ткани, функции, энергия

    Показать все теги
     
    Рекомендуем
     
     
     
    Каталог : Анатомия Физиология и этология Латинский язык Гистология Эмбриология Микробиология Вирусология Генетика Фармакология и токсикология Биохимия Патология Акушерство и гинекология Эпизоотология, инфекционные болезни Паразитология и инвазионные болезни Внутренние незаразные болезни Хирургия Зоогигиена Разведение животных Кормление, кормопроизводство
    При использовании материалов сайта, гиперссылка на на www.vetlib.ru обязательна. 
    Copyright © 2009-2017 VetLib.ru {mnt}