биосуб-1 Утратах
Измельченную навеску массой 1—2 г заливают 20 мл ацетона и оставляют на 30 мин, после чего ацетон отфильтровывают и процедуру повторяют с новой порцией ацетона. Ацетоновые экстракты объединяют, добавляют 50 мл воды и 1 мл 20 %-ного раствора трихлоруксусной кислоты. Смесь ставят в холодильник на 1 ч, затем фильтруют в делительную воронку. Фильтрат дважды экстрагируют 40 мл хлороформа, после чего экстракты объединяют и испаряют растворитель под вакуумом досуха.
Если видны остатки жира, прибавляют небольшими порциями 5—6 мл ацетона, раствор фильтруют, испаряют растворитель досуха, остаток растворяют в 1 мл ацетона.
Сорбент — силикагель с крахмалом. Подвижный растворитель — бензол-ацетон (9:1). Проявляющий ре-агент — о-толидин-йодид (0,2 г о-толидина растворяют в 2 мл уксусной кислоты, 0,8 г йодида калия растворяют в 2 мл воды, растворы смешивают и доводят водой до 200 мл) после облучения УФ-светом.
Rf для фталофоса — 0,76, для фталимида — 0,42, для оксиметилфталимида — 0,27.
4. Определение антио, фосфамида в кормах
10 г измельченного корма дважды в делительной воронке экстрагируют 40 мл хлороформа. Экстракты объединяют и испаряют досуха. Остаток растворяют 4 раза в воде по 2 мл, раствор фильтруют и экстрагируют дважды хлороформом по 10 мл. Экстракты объединяют и испаряют досуха. Остаток растворяют в 1 мл ацетона.
Сорбент — силикагель с крахмалом. Подвижный растворитель — хлороформ с ацетоном (9:1). Проявляющий реагент — гидроксид натрия — нитрат серебра.
Хроматограмму опрыскивают раствором гидроксида натрия и помещают в термостат при 100 °С на 5 мин. После охлаждения пластинку опрыскивают аммиачно-ацетоновым раствором нитрата серебра и вновь помещают в термостат при 100 °С на 10 мин. Антио и фосфа-мид проявляются в виде темно-серых пятен.
Rf для антио — 0,72, для фосфамида — 0,45.
5. Определение севина в тканях животных и молоке
2—3 г измельченных тканей экстрагируют дважды 30 мл, затем 50 мл гексана или хлороформа. Экстракт испаряют досуха, к остатку прибавляют 5 мл метанола, 30 мл воды и 2—3 г натрия хлорида. Водно-спиртовый раствор промывают петролейным эфиром и экстрагируют дважды хлороформом по 40 мл. Экстракт испаряют досуха. Остаток растворяют в 1 мл гексана и хроматографируют.
К 20 мл молока прибавляют 10—15 г безводного натрия сульфата, 20 мл хлороформа и экстрагируют. Далее поступают так, как и с тканями.
Сорбент — силуфол. Подвижный растворитель — гексан-ацетон (3:1). Проявляющий реагент — n-нитро-бензилфторборат диазония — едкое кали.
Пластинки обрабатывают 1 н. раствором гидроксида калия в этаноле с последующим опрыскиванием раствором этиленгликоля, насыщенного фторборатом п-нитро-бензилдиазония.
Севин проявляется в виде красно-оранжевых пятен.
Для севина — 0,33—0,37.
6. Определение производных фенилмочевины в зерне
40 г измельченного зерна заливают 15 мл концентриро-G ванной серной кислоты на 2 ч, затем осторожно добавляют 100 мл воды и подщелачивают 40 мл 50 %-ного раствора едкого натра. Смесь экстрагируют трижды н-гексаном по 25 мл. Экстракт объединяют и испаряют-» досуха. Сухой остаток растворяют в небольшом количестве диэтилового эфира и наносят на пластинку.
Сорбент — окись алюминия с гипсом. Подвижный растворитель — гексан-ацетон (3:1).
Пластинку подсушивают и помещают на 1 ч в сушильный шкаф при 160—170 °С. После охлаждения опрыскивают реактивом № 1 (к 46 мл воды добавляют 4 мл концентрированной соляной кислоты и 1 г нитрита натрия), затем сразу же реактивом № 2 (к 50 мл воды добавляют 2,8 г едкого кали и 0,1 г L-нафтола).
Rf для монурона — 0,43, для диурона — 0,4.1, для линурона — 0,42, для нибурона — 0,27, для котора-на — 0,53, для паторана — 0,48, для фенурона — 0,45, для тенорана — 0,32, для солана — 0,70, для дикри-ла — 0,44.
7. Определение ртутьорганических соединений
В отгонную колбу берут 10 г измельченного материала, добавляют 60 мл 1 н. раствора соляной кислоты, 2 мл 0,5 М раствора хлорной t меди и несколько кусочков пемзы. Колбу присоединяют к холодильнику с помощью шлифа и нагревают.
Отгон (дистиллят) собирают в делительную воронку, куда предварительно наливают 6 мл толуола. Собирают 60 мл дистиллята, колбу охлаждают, вносят в нее 20 мл толуола и вновь производят дистилляцию. Полученный дистиллят встряхивают 5 мин. После расслоения нижнюю фазу отбрасывают, а толуольный экстракт промывают водой и фильтруют через вату (промытую толуолом) в делительную воронку. К экстракту добавляют 5 мл 0,0025 М раствора тиосульфата натрия в разбавленном этаноле и смесь встряхивают 2 мин. Нижнюю фазу сливают, а толуольную еще раз обрабатывают раствором тиосульфата натрия.
К объединенным толуольным растворам тиосульфата натрия добавляют 2,5 мл 3 М раствора калия йодида, 5 мл бензола и содержимое встряхивают 2 мин. Верхний бензольный экстракт сливают в фарфоровую чашку и концентрируют его до объема 0,1—0,2 мл, предварительно добавляя к нему 3—4 капли 0,02 %-ного дитизо-на. Раствор окрашивается в зеленоватый цвет.
Для приготовления свидетелей берут 1 мл стандартных растворов этилмеркулхлорида или других ртутных соединений, вносят в делительную воронку, содержащую 10 мл 0,0025 М тиосульфата натрия. Содержимое перемешивают, добавляют 2,5 мл 3 М раствора калия йодида, 5 мл бензола и экстрагируют 2 мин. Полученные растворы упаривают, обработав 0,02 %-ным раствором дитизона.
Экстракты проб и свидетели наносят на пластинки в двух повторностях.
Подвижный растворитель — н-гексан-ацетон (4:1).
Органические соединения ртути выявляются в виде желто-оранжевых пятен.
Rf для фенилртути — 0,35, для метоксиэтилртути — 0,42, для метилртути — 0,48.
8. Определение производных 2,4-Д
Навеску пробы (5 г) измельчают в фарфоровой ступке с чистым песком, заливают 0,5 %-ным раствором едкого натра (20 мл) и в течение 30 мин периодически перемешивают. Содержимое ступки переносят в химический стакан, куда вносят 10 мл насыщенного раствора фосфорно-вольфрамо-вой (фосфорно-молибденовой) кислоты и 10 мл концентрированной соляной кислоты. После смешивания выдерживают 15 мин и фильтруют. Осадок промывают 10 %-ным раствором соляной кислоты.
Фильтрат переносят в делительную воронку и заливают 50 мл хлороформа (эфира). Содержимое осторожно перемешивают в течение 2—3 мин и хлороформенную фазу сливают в химический стакан. Экстрагирование хлороформом повторяют.
Экстракты объединяют, выпаривают в водяной бане до сухого остатка. К осадку добавляют 2 мл спирт-эфира, тщательно перемешивают и упаривают до 0,2 мл. Этот объем наносят на хроматографическую пластинку.
Подвижный растворитель — циклогексан, бензол, ледяная уксусная кислота (10:2:3). Проявляющий реагент—0,1 н. раствор нитрата серебра в 3 н. растворе азотной кислоты.
После подсушивания проявителя пластинку облучают 10—15 мин ультрафиолетовым светом. При наличии гербицидов группы 2,4-Д появляются темно-серые пятна, площадь которых и Rf сравнивают со свидетелем.
ЗАНЯТИЕ № 6
6. Тема: ЭКСПРЕСС-МЕТОДЫ ОБНАРУЖЕНИЯ ТОКСИЧНЫХ МЕТАЛЛОВ И МЫШЬЯКА
Цель занятия: освоить экспресс –методы обнаружения токсичных металлов и мышьяка методом тонкослойной хроатографии.
Материадьное обеспечение: ацетон, н-гексан, петролейный эфир, бензол, хлороформ или их смеси, спирты, хлороформ, этилацетат, пластинки с тонким слоем
Уважаемый посетитель, Вы зашли на сайт как незарегистрированный пользователь. Мы рекомендуем Вам зарегистрироваться либо зайти на сайт под своим именем.