автор: Admin 22 июля 2009 просмотров: 30499

циклов в зависимости от возбудителя. Каждый цикл состоит из трех этапов.

 

1.     Денатурация. 92-95 градусов С, 20-60 секунд. Происходит разрыв водородных связей цепей ДНК.

2.     Отжиг - присоединение праймеров. 50-60 градусов С, 40-60 секунд. Происходит забрасывание праймеров, нуклеотидов и ДНК-полимеразы.

3.     Элонгация - достраивание цепей ДНК. 68-72 градуса С, 40-60 секунд. Число цепочек ДНК удваивается. Образовавшиеся в первом цикле цепочки ДНК служат матрицами для последующих циклов и т.д. Таким образом в каждом цикле идет удвоение числа копий амплифицируемого участка, что позволяет за 25-40 циклов наработать 2²⁵-2⁴⁰ участков ДНК, что позволяет обнаружить их методом электрофореза.

 

В ПЦР используют праймеры из консервативных участков ДНК вируса, которые имеют уникальную последовательность для каждого возбудителя.

 

Методика постановки.

 

Из исследуемого материала выделяют НК, которую помещают в чистую пробирку и добавляют амплифицирующую смесь, которая состоит из:

-       Буфера

-       ДНК-полимеразы

-       Раствора 2-х видов праимеров

-       4-х видов нуклеотидов

-       Магний-хлорного катализатора

-       Крезолового красного для визуальной оценки

-       Доливают деионизированной воды.

-       Сверху капают минеральное масло.

 

Пробирки помещают в програмируемый термостат-амплификатор и проводят амплификацию в автоматическом режиме по заданной программе для соответствующего вида возбудителя (2-3 часа). Одновременно ставят положительный и отрицательный контроль.

 

Регистрация результатов - детекция амплификонов. Проводят методом электрофореза в 1-2% агаровом геле в присутствии бромистого этидия, который соединяется с фрагментами ДНК и высвечивается в виде полосок при УФО (трансилюминатор).

 

Противовирусный иммунитет.

 

В понятие противовирусного иммунитета входят три категории: видовая резистентность, неспецифические клеточные и обще физиологические реакции и специфический иммунитет.

 

1.     Естественная видовая резистентность.

 

Естественная видовая резистентность это невосприимчивость большого количества видов животных к некоторым заболеваниям вирусной этиологии. Это обусловлено тем, что вирион не адсорбируется на поверхности клетки.

 

-       Абсолютная естественная видовая резистентность.

-       Относительная естественная видовая резистентность обусловлена тем, что невосприимчивое животное подвергнуто воздействию таких ослабляющих факторов как:

*стрессовые факторы

*большие дозы гормонов

*сильное охлаждение или перегрев

*возраст животного

*генетическая обусловленность.

2.     Неспецифические клеточные и общефизиологические реакции.

-       Температура

-       Гормоны - снижают резистентность, однако соматотропные гормоны повышают резистентность и усиливают воспалительную реакцию.

-       Беременное животное заболевает быстрее и заболевание протекает более тяжело.

-       Физиологическое состояние выделительной системы - скорость выделения вируса из организма.

-       Гуморальные факторы - наличие сывороточных ингибиторов (термостабильных или термолабильных). У каждого вида преобладает свой тип.

 

Интерферрон - особый клеточный белок, который продуцируется зараженными клетками. Это несколько белков, отличающихся по молекулярной массе. По антигенной специфичности они делятся на альфа, бета и гамма белки. Они специфичны к вирусам, бактериям, синтетическим белкам.

Образование интерферрона состоит из двух фаз:

I фаза.

1.     Индукция интерферрона при адсорбции вируса на клетке.

2.     Захват индуктора.

3.     Процесс инициации индуктора.

4.     Депрессия генов интерферрона.

5.     Транскрипция иРНК для интерферрона.

II фаза.

1.     Трансляция иРНК-интерферрон.

2.     Образование интерферроида.

3.     Гликозирование интерферроида и образование интерферрона.

4.     Выделение интерферрона.

 

Основная роль в образовании интерферрона принадлежит иммунокомпетентным клеткам.

 

1-й тип интерферрона - классический. Образуется в лимфоцитах периферической крови, молока, молозива в ответ на вирусную инфекцию.

 

2-й тип интерферрона -  иммунный. Образован при помощи митогенов или при сенсибилизации клеток в ответ на повторное введение.

 

Взаимодействие интерферрона с клеткой.

 

1.     Идет адсорбция на рецепторах клетки.

2.     Индукция антивирусного состояния.

3.     Развитие антивирусной резистентности.

4.     Образование интерферрон-индуцируемых белков.

5.     Выраженная резистентность клетки.

 

 

 

Механизм антивирусного действия интерферрона. - интерферрон не влияет на адсорбцию вируса, на виропексис, на процесс высвобождения НК вируса, не влияет на композицию вирусной частицы и ее выход. Интерферрон не действует на внеклеточный вирус в отличии от антител. Интерферрон подавляет репликацию вируса, т.е. он действует на вирус опосредованно, через чувствительную клетку в которой не нарушен синтез клеточной иРНК и клеточных белков.

Интерферроны делятся на экзо- и эндогенные. Эндогенные интерферроны образуются в пораженной клетке в ответ на введение вируса, т.е пока введенный вирус не успел достаточно разрушить клетку. Экзогенный интерферрон попадает в клетку из вне.

 

Свойства интерферрона.

-       Не обладает видоспецифичностью.

-       Экзогенный интерферрон проявляет свое максимальное действие, если заражение клетки ещё не произошло.

-       Стимулирует фагоцитоз

-       Угнетает рост клеток

-       Угнетает АТ-образование.

-       Способствует усилению активности Т-киллеров.

 

Специфический иммунитет.

 

1.     Активный иммунитет.

-       Факторы гуморального иммунитета Ig G, ранний Ig M.

-       Секреторный иммунитет - защита естественных слизистых оболочек. Связан с Ig A - защита ЖКТ и дыхательных путей.

 

Специфическая профилактика вирусных инфекций.

 

1.     Живые вакцины.

-       Полученные на основе адаптации полевых штаммов к какой либо чувствительной системе.

*к культуре клеток.

*к куриным эмбрионам

*к естественно восприимчивым лабораторным животным.

-       гетерологичные живые вакцины. (берут от индюков и заражают кур. Куры приобретают резистентность.)

-       метод селекции (за счет отбора естественных природных штаммов).

 

2.     Инактивированные вакцины.

 

-       наработка вирус содержащего материала с использованием злых полевых штаммов.

-       Инактивация вируса (формалин, бета-пропиолактон, препараты азадинового ряда, температура, УФО, гамма-лучи, сульфат меди.

-       Добавление адьюванта в инактивтрованную вакцину. Адьювант адсорбирует на своей поверхности частицы разрушенного вируса. (сорбент-адьюванты: Al-Al(OH)₃, SiO₂ или масляные адьюванты).

-       Добавление сапонинов для суперраздражающего действия при в/м и п/к инъекциях. Применяют в очень малых концентрациях для образования воспаления в месте введения.

 

Семейство Picornaviridae. (pico-маленький, RNA)

 

Вирион лишен суперкапсида, кубической формы, 22-30 нм. Липидов и углеводов в составе нет. Геном - односпиральная, линейная РНК. Размножение происходит в цитоплазме клеток.

 

В семейство входят 5 родов:

-       Enterovirus - ЖК-заболевания, менингиты, энцефаломиелиты, коньюнкт-ты, везик пораж.

-       Hepatovirus - Гепатит А человека и обезьян.

-       Cardiovirus - поражение сердца, головного и спинного мозга.

-       Rhinovirus - поражение верхних дыхательных путей, распостраняется аэрогенно.

-       Aphtovirus - включает вирусы ящура.

 

Вирус Ящура.

 

Ящур - остропротекающая, высококонтагеозная болезнь парнокопытных, , проявляющаяся лихорадкой, везикулярным поражением слизистой оболочки рта, кожи венчика и вымени, у молодых животных - поражением миокарда и скелетных мышц. Регистрируется во всех странах мира.

Клиника.

   У КРС и свиней протекает остро, как правило, доброкачественно. Инк. период - от 1-3 до 7-10 дней. Затем повышается темп, угнетение, отказ от корма, прекращение жвачки. На 2-3 день образуются афты, которые лопаются и обр эрозии.

   У телят протекает в безафтовой форме в виде острого гастероэнтерита. 20-25% погибает от паралича сердца.

   У свиней симптомы сходны с КРС, У поросят-сосунов протекает в септической форме (гибель 60-80%).

 

Вирус открыт Лефлером в 1898г. Вирус имеет одноцепочечною РНК (является инфекционной)

Различают 7 АГ вируса.

 

Источником вируса являются больные животные. Содержится в выдыхаемом воздухе. Чаще всего заражение происходит при непосредственном контакте животных.

 

Продолжительность иммунитета у переболевших животных - 8-12 месяцев. В настоящее время применяются сорбированные (КРС) и эмульгированные (для свиней) вакцины.

 

Семейство Poxviridae. (лат.  pox -пустула, язва)

 

Поксвирусы - большая группа вирусов, поражающая позвоночных и насекомых.  Вирион представляет собой овальную или прямоугольную частицу размером 220-450 на 140-260 нм. Частица имеет сложную структуру. Она состоит из центральной части - нуклеотида, овальных тел и наружной оболочки. Нуклеотид имеет двояковогнутую форму. Наружная оболочка состоит из липидов и трубчатых белковых структур.

 

Геном представлен двухспиральной молекулой ДНК. ДНК не обладает инфекционностью. С нуклеотидом связанно более 15 ферментов. Состав вириона по массе: белки - 88%, ДНК - 5%, липиды - 4%, углеводы - 3%.

 

Размножение идет

Уважаемый посетитель, Вы зашли на сайт как незарегистрированный пользователь. Мы рекомендуем Вам зарегистрироваться либо зайти на сайт под своим именем.