циклов в зависимости от возбудителя. Каждый цикл состоит из трех этапов.
1. Денатурация. 92-95 градусов С, 20-60 секунд. Происходит разрыв водородных связей цепей ДНК.
2. Отжиг - присоединение праймеров. 50-60 градусов С, 40-60 секунд. Происходит забрасывание праймеров, нуклеотидов и ДНК-полимеразы.
3. Элонгация - достраивание цепей ДНК. 68-72 градуса С, 40-60 секунд. Число цепочек ДНК удваивается. Образовавшиеся в первом цикле цепочки ДНК служат матрицами для последующих циклов и т.д. Таким образом в каждом цикле идет удвоение числа копий амплифицируемого участка, что позволяет за 25-40 циклов наработать 225-240 участков ДНК, что позволяет обнаружить их методом электрофореза.
В ПЦР используют праймеры из консервативных участков ДНК вируса, которые имеют уникальную последовательность для каждого возбудителя.
Методика постановки.
Из исследуемого материала выделяют НК, которую помещают в чистую пробирку и добавляют амплифицирующую смесь, которая состоит из:
- Буфера
- ДНК-полимеразы
- Раствора 2-х видов праимеров
- 4-х видов нуклеотидов
- Магний-хлорного катализатора
- Крезолового красного для визуальной оценки
- Доливают деионизированной воды.
- Сверху капают минеральное масло.
Пробирки помещают в програмируемый термостат-амплификатор и проводят амплификацию в автоматическом режиме по заданной программе для соответствующего вида возбудителя (2-3 часа). Одновременно ставят положительный и отрицательный контроль.
Регистрация результатов - детекция амплификонов. Проводят методом электрофореза в 1-2% агаровом геле в присутствии бромистого этидия, который соединяется с фрагментами ДНК и высвечивается в виде полосок при УФО (трансилюминатор).
Противовирусный иммунитет.
В понятие противовирусного иммунитета входят три категории: видовая резистентность, неспецифические клеточные и обще физиологические реакции и специфический иммунитет.
1. Естественная видовая резистентность.
Естественная видовая резистентность это невосприимчивость большого количества видов животных к некоторым заболеваниям вирусной этиологии. Это обусловлено тем, что вирион не адсорбируется на поверхности клетки.
- Абсолютная естественная видовая резистентность.
- Относительная естественная видовая резистентность обусловлена тем, что невосприимчивое животное подвергнуто воздействию таких ослабляющих факторов как:
*стрессовые факторы
*большие дозы гормонов
*сильное охлаждение или перегрев
*возраст животного
*генетическая обусловленность.
2. Неспецифические клеточные и общефизиологические реакции.
- Температура
- Гормоны - снижают резистентность, однако соматотропные гормоны повышают резистентность и усиливают воспалительную реакцию.
- Беременное животное заболевает быстрее и заболевание протекает более тяжело.
- Физиологическое состояние выделительной системы - скорость выделения вируса из организма.
- Гуморальные факторы - наличие сывороточных ингибиторов (термостабильных или термолабильных). У каждого вида преобладает свой тип.
Интерферрон - особый клеточный белок, который продуцируется зараженными клетками. Это несколько белков, отличающихся по молекулярной массе. По антигенной специфичности они делятся на альфа, бета и гамма белки. Они специфичны к вирусам, бактериям, синтетическим белкам.
Образование интерферрона состоит из двух фаз:
I фаза.
1. Индукция интерферрона при адсорбции вируса на клетке.
2. Захват индуктора.
3. Процесс инициации индуктора.
4. Депрессия генов интерферрона.
5. Транскрипция иРНК для интерферрона.
II фаза.
1. Трансляция иРНК-интерферрон.
2. Образование интерферроида.
3. Гликозирование интерферроида и образование интерферрона.
4. Выделение интерферрона.
Основная роль в образовании интерферрона принадлежит иммунокомпетентным клеткам.
1-й тип интерферрона - классический. Образуется в лимфоцитах периферической крови, молока, молозива в ответ на вирусную инфекцию.
2-й тип интерферрона - иммунный. Образован при помощи митогенов или при сенсибилизации клеток в ответ на повторное введение.
Взаимодействие интерферрона с клеткой.
1. Идет адсорбция на рецепторах клетки.
2. Индукция антивирусного состояния.
3. Развитие антивирусной резистентности.
4. Образование интерферрон-индуцируемых белков.
5. Выраженная резистентность клетки.
Механизм антивирусного действия интерферрона. - интерферрон не влияет на адсорбцию вируса, на виропексис, на процесс высвобождения НК вируса, не влияет на композицию вирусной частицы и ее выход. Интерферрон не действует на внеклеточный вирус в отличии от антител. Интерферрон подавляет репликацию вируса, т.е. он действует на вирус опосредованно, через чувствительную клетку в которой не нарушен синтез клеточной иРНК и клеточных белков.
Интерферроны делятся на экзо- и эндогенные. Эндогенные интерферроны образуются в пораженной клетке в ответ на введение вируса, т.е пока введенный вирус не успел достаточно разрушить клетку. Экзогенный интерферрон попадает в клетку из вне.
Свойства интерферрона.
- Не обладает видоспецифичностью.
- Экзогенный интерферрон проявляет свое максимальное действие, если заражение клетки ещё не произошло.
- Стимулирует фагоцитоз
- Угнетает рост клеток
- Угнетает АТ-образование.
- Способствует усилению активности Т-киллеров.
Специфический иммунитет.
1. Активный иммунитет.
- Факторы гуморального иммунитета Ig G, ранний Ig M.
- Секреторный иммунитет - защита естественных слизистых оболочек. Связан с Ig A - защита ЖКТ и дыхательных путей.
Специфическая профилактика вирусных инфекций.
1. Живые вакцины.
- Полученные на основе адаптации полевых штаммов к какой либо чувствительной системе.
*к культуре клеток.
*к куриным эмбрионам
*к естественно восприимчивым лабораторным животным.
- гетерологичные живые вакцины. (берут от индюков и заражают кур. Куры приобретают резистентность.)
- метод селекции (за счет отбора естественных природных штаммов).
2. Инактивированные вакцины.
- наработка вирус содержащего материала с использованием злых полевых штаммов.
- Инактивация вируса (формалин, бета-пропиолактон, препараты азадинового ряда, температура, УФО, гамма-лучи, сульфат меди.
- Добавление адьюванта в инактивтрованную вакцину. Адьювант адсорбирует на своей поверхности частицы разрушенного вируса. (сорбент-адьюванты: Al-Al(OH)3, SiO2 или масляные адьюванты).
- Добавление сапонинов для суперраздражающего действия при в/м и п/к инъекциях. Применяют в очень малых концентрациях для образования воспаления в месте введения.
Семейство Picornaviridae. (pico-маленький, RNA)
Вирион лишен суперкапсида, кубической формы, 22-30 нм. Липидов и углеводов в составе нет. Геном - односпиральная, линейная РНК. Размножение происходит в цитоплазме клеток.
В семейство входят 5 родов:
- Enterovirus - ЖК-заболевания, менингиты, энцефаломиелиты, коньюнкт-ты, везик пораж.
- Hepatovirus - Гепатит А человека и обезьян.
- Cardiovirus - поражение сердца, головного и спинного мозга.
- Rhinovirus - поражение верхних дыхательных путей, распостраняется аэрогенно.
- Aphtovirus - включает вирусы ящура.
Вирус Ящура.
Ящур - остропротекающая, высококонтагеозная болезнь парнокопытных, , проявляющаяся лихорадкой, везикулярным поражением слизистой оболочки рта, кожи венчика и вымени, у молодых животных - поражением миокарда и скелетных мышц. Регистрируется во всех странах мира.
Клиника.
У КРС и свиней протекает остро, как правило, доброкачественно. Инк. период - от 1-3 до 7-10 дней. Затем повышается темп, угнетение, отказ от корма, прекращение жвачки. На 2-3 день образуются афты, которые лопаются и обр эрозии.
У телят протекает в безафтовой форме в виде острого гастероэнтерита. 20-25% погибает от паралича сердца.
У свиней симптомы сходны с КРС, У поросят-сосунов протекает в септической форме (гибель 60-80%).
Вирус открыт Лефлером в 1898г. Вирус имеет одноцепочечною РНК (является инфекционной)
Различают 7 АГ вируса.
Источником вируса являются больные животные. Содержится в выдыхаемом воздухе. Чаще всего заражение происходит при непосредственном контакте животных.
Продолжительность иммунитета у переболевших животных - 8-12 месяцев. В настоящее время применяются сорбированные (КРС) и эмульгированные (для свиней) вакцины.
Семейство Poxviridae. (лат. pox -пустула, язва)
Поксвирусы - большая группа вирусов, поражающая позвоночных и насекомых. Вирион представляет собой овальную или прямоугольную частицу размером 220-450 на 140-260 нм. Частица имеет сложную структуру. Она состоит из центральной части - нуклеотида, овальных тел и наружной оболочки. Нуклеотид имеет двояковогнутую форму. Наружная оболочка состоит из липидов и трубчатых белковых структур.
Геном представлен двухспиральной молекулой ДНК. ДНК не обладает инфекционностью. С нуклеотидом связанно более 15 ферментов. Состав вириона по массе: белки - 88%, ДНК - 5%, липиды - 4%, углеводы - 3%.
Размножение идет
Уважаемый посетитель, Вы зашли на сайт как незарегистрированный пользователь. Мы рекомендуем Вам зарегистрироваться либо зайти на сайт под своим именем.